タンパク質間相互作用解析のアプローチ The analysis of protein-protein interaction with special reference to PRIP-1

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著者

    • 兼松 隆 KANEMATSU Takashi
    • 九州大学大学院歯学研究院口腔細胞工学分野 Laboratory of Molecular Cellular Biochemistry, Faculty of Dental Science, and Station for Collaborative Research, Kyushu University
    • 平田 雅人 HIRATA Masato
    • 九州大学大学院歯学研究院口腔細胞工学分野 Laboratory of Molecular Cellular Biochemistry, Faculty of Dental Science, and Station for Collaborative Research, Kyushu University

抄録

ポストシーケンス時代の到来にともない,膨大な機能の分からないタンパク質が出現することは,容易に想像がつく.また,機能の分かったタンパク質においても,新たな機能の解明の必要性が生じることもあろう.現在,機能の分からないタンパク質の機能予測をする場合,そのタンパク質が結合する分子を見つけだして,それを手がかりに機能予測をするという手法がよくとられる.本稿では,タンパク質相互作用分子の検索法から両者の相互作用解析法までを順を追って紹介する.実験技術として目新しいものではないが,タンパク質間相互作用解析のアプローチとそれぞれの解析法の利点や問題点等も含めて解説する.さらに,このアプローチを用いて,我々は新規イノシトール1,4,5-三リン酸結合タンパク質(PRIP-1)がプロテインホスファターゼ1情報伝達系とGABA<sub>A</sub>受容体情報伝達系に関わることを明らかにしたので合わせて紹介する.<br>

Analysis of protein-protein interaction is one of the powerful methods for elucidating the new functions of functionally unknown proteins. Using this approach, we isolated two proteins interacting with PRIP-1, which was isolated as a new Ins(1,4,5)P<sub>3</sub> binding protein from brain. One was protein phosphatase 1 catalytic subunit (PP1c) and the other was GABARAP (GABA<sub>A</sub>-receptor-associated protein). The region of PRIP-1 responsible for their interaction was the site preceding to the pleckstrin homology domain of PRIP-1 for PP1c and the EF-hand motifs of PRIP-1 for GABARAP, which were determined by β-galactosidase assay of yeast two-hybrid system. The association between PRIP-1 and PP1c was confirmed in vitro by a pull-down assay, a far-western assay, an immunoprecipitation analysis and a surface plasmon resonance analysis. The interaction of PRIP-1 with PP1c resulted in inhibition of the catalytic activity of PP1c in a PRIP-1 concentration-dependent manner. The association between PRIP-1 and GABARAP was also confirmed by a pull-down assay, and we found that PRIP-1 competitively inhibited the binding of the γ2 subunit of the GABA<sub>A</sub> receptor to GABARAP in vitro. Our electrophysiological and behavioral analysis of PRIP-1 knockout mice revealed that PRIP-1 is essential for the function of GABA<sub>A</sub> receptors, especially in response to the agents acting on the γ2 subunit.<br>

収録刊行物

  • 日本薬理学雑誌

    日本薬理学雑誌 119(4), 241-246, 2002-04-01

    公益社団法人 日本薬理学会

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各種コード

  • NII論文ID(NAID)
    10008991960
  • NII書誌ID(NCID)
    AN00198335
  • 本文言語コード
    JPN
  • 資料種別
    NOT
  • ISSN
    00155691
  • NDL 記事登録ID
    6120823
  • NDL 雑誌分類
    ZS51(科学技術--薬学)
  • NDL 請求記号
    Z19-247
  • データ提供元
    CJP書誌  NDL  J-STAGE 
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