二色の蛍光を用いたFRIP法による太平洋産および大西洋産クロマグロの簡易判別 Discrimination of Thunnus thynnus orientalis and T. thynnus thynnus Using Double-fluorescence FRIP Assay

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抄録

FRIP法は,DNA中の既知のSNPsを検出する技術である.1つの品種に対して1組の蛍光ドナー/アクセプタープローブを用いることで,特定の種であるか否かを判別可能であり,解析時間も短く,高精度で解析できる特徴を持つ.<BR>本研究では,2色の蛍光プローブを用いたFRIP法により,太平洋産および大西洋産クロマグロの同時種判別技術を開発した.FITC標識した太平洋産クロマグロ識別用プローブおよびTAMRA標識した大西洋産クロマグロ識別用プローブを同一溶液中に混合した.6種のマグロサンプルからそれぞれ転写RNAを調製し,プローブとのハイブリダイゼーション反応を行ったところ,すべてのサンプルにおいて,一旦FRETによる蛍光の消光が確認された.さらに得られたDNA : RNAハイブリッド溶液にRNase Aを添加すると,ミスマッチの有無に応答して蛍光強度に変化が生じ,精度良く種を判別できた.<BR>同様の結果は,UV光を励起光として用いた目視判別用の濃縮反応液においても確認された.FRIP法は,簡易,迅速,高精度で安価な分析法として,様々な場面で利用されるものと期待される.

A combination of double fluorescence-labeled probes was applied to multiplex discrimination of <I>Thunnus thynnus orientalis</I> (Pacific bluefin) and <I>T. thynnus thynnus</I> (Atlantic bluefin) in the fluorogenic ribonuclease protection (FRIP) assay. The FRIP assay provides information about the absence or presence of known single nucleotide polymorphisms (SNPs). It requires only one pair of fluorescence donor- and acceptor probes for discriminating one species, and allows rapid and sensitive analysis. DNA was extracted from individuals of six <I>Thunnus</I> species and subjected to PCR with primers targeting the T7 RNA polymerase promoter region, and then <I>in vitro</I> transcribed RNA was produced. Both an FITC-labeled probe targeting Pacific bluefin tuna and a TAMRA-labeled probe targeting Atlantic bluefin tuna were simultaneously hybridized to individual RNA samples in hybridization buffer solution. Fluorescence emissions were temporary quenched via FRET, but fluorescence intensity recovered in the response to the presence of mismatches in DNA- RNA hybridridization following RNase A digestion. Similar results were also observed in visualization of FRIP reaction mixtures under UV light excitation. The FRIP assay, which is a simple, rapid, sensitive and economic analytical method, can be employed in a variety of food inspection and authentication applications.

収録刊行物

  • 日本食品科学工学会誌 : Nippon shokuhin kagaku kogaku kaishi = Journal of the Japanese Society for Food Science and Technology  

    日本食品科学工学会誌 : Nippon shokuhin kagaku kogaku kaishi = Journal of the Japanese Society for Food Science and Technology 55(4), 164-169, 2008-04-15 

    Japanese Society for Food Science and Technology

参考文献:  9件

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各種コード

  • NII論文ID(NAID)
    10021178538
  • NII書誌ID(NCID)
    AN10467499
  • 本文言語コード
    JPN
  • 資料種別
    ART
  • ISSN
    1341027X
  • NDL 記事登録ID
    9455636
  • NDL 雑誌分類
    ZP34(科学技術--食品工学・工業)
  • NDL 請求記号
    Z17-126
  • データ提供元
    CJP書誌  NDL  J-STAGE 
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