培養細胞を用いたgap-junctionを介する細胞間情報交換に関する研究　Scrape-loading法による検討

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  • A study on gap junction intercellular communication of NRK-52E cells in culture with a scrape loading method
  • バイヨウ サイボウ オ モチイタ gap junction オ カイスル サイボウ カン ジョウホウ コウカン ニ カンスル ケンキュウ Scrapc loadingホウ ニ ヨル ケントウ

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抄録

scrape loadingによって細胞内に導入した蛍光色素lucifer yellowの隣接細胞への拡散を利用してGJICについて研究する方法の有用性について,腎由来の上皮様細胞であるNRK-52E細胞を用いて検討を行った.Scrapeによって傷ついた細胞に直接入った色素とscrapeによって細胞に入った後,隣接した細胞にgap junction(ギャップ結合)を介して拡散した色素との鑑別は,同時に適用したethidium bromideによる蛍光を観察することによって行った.その結果,NRK-52E細胞でも,GJIC(Gap junction intercellular communication)が活発に行われていることが明らかとなったが,腫瘍プロモーターとして知られているTPA(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)は,この細胞ではGJICを抑制しなかった

Using NRK-52E cells (an epithelial cell line derived from rat kidney) in culture, usefulness of "scrape-loading method" as developed by EL-Fouly, Trosko and Chang (1987) for studying the intercellular communication through gap junction(GJIC) was assessed. Lucifer yellow and ethidium bromide were used as fluorescent probes and were allowed to be taken up by the cells through the scratch made on the cells by a surgical scissor. Ethidium bromide was bound to the nucleus of the scratched cells and was retained within the cells, while lucifer yellow diffused widely to adjacent cells through gap junction. Thus, the extent of GJIC could be determined by counting the numbers of cells which were stained not only by ethidium bromide but also by lucifer yellow. A representative tumor promoter, TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate), failed to inhibit the GJIC in NRK-52E cells. The use of the tumor promoters that are specific to kidney cells such as sodium barbital (Konishi, Donovan and Ward, 1990) seems to be necessary.

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