ヒョウヒダニアレルゲンDer p 1/Der f 1測定高感度Enzyme-Linked Immunosorbent Assayの確立 HIGHLY SENSITIVE ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY FOR THE QUANTIFICATION OF ALLERGENS FROM DERMATOPHAGOIDES, DER P 1 AND DER F 1

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抄録

【目的】ヒョウヒダニの主要アレルゲンDer p 1およびDer f 1をそれぞれ特異的に定量する高感度ELISAを確立した.【方法】Der p 1あるいはDer f 1に対する抗体を吸着させたプレートにアレルゲン,ビオチン化抗体,HRP-streptavidinを順次反応後,固相に結合した酵素活性を比色法で定量した.【結果】これらELISAにおけるDer p 1およびDer f 1の測定範囲は,ともに40〜2500pg/mlであった.また,Der p 1のELISAの測定内および測定間変動係数は,それぞれ0.99〜4.38%および0.68〜3.02%であった.一方,Der f 1のELISAの測定内および測定間変動係数は,それぞれ1.54〜3.65%および0.39〜4.77%であった.さらに,高感度ELISAにおけるDer p 1あるいはDer f 1に対する抗原特異性も確認された.【考察】今後,室内塵中のアレルゲン測定のみならず,ダニアレルゲン不活化の研究など多方面で活用できるであろう.

Aim: In order to specifically quantify the two major Dermatophagoides spp. allergens, Der p 1 and Der f 1, separately, we tried to establish a highly sensitive enzyme-linked immunosorbentassay (ELISA). Methods: Ninety-six-well ELISA plates were coated with mouse monoclonal antibodies specific against Der p 1 or Der f 1. Allergen samples were incubated in the wells for 2 hours at 37℃. After washing with PBS-T, biotinylated rabbit anti-Der 1 polyclonal antibody was added to the wells. The allergens were detected using horse radish peroxidase-conjugated streptavidin, an enzyme substrate (TMB/H_2O_2) and a microplate reader. Results: The working range of both ELISA systems for Der p 1 and Der f 1 was 40-2500pg/ml. The intra- and inter-assay coefficients of variation for reproducibility were 0.99-4.38% and 0.68-3.02%, respectively, in Der p 1 ELISA and 1.54-3.65% and 0.39-4.77%, respectively, in Der f 1 ELISA. Moreover, these ELISA systems showed that there was no cross-reactivity between Der p 1 and Der f 1 allergens. Conclusion: These ELISA systems may be useful for measuring less than 1ng/ml of major mite allergens in house dust samples, various pharmaceutical studies such as evaluation of an allergen-inactivating agent, and standardizing recombinant/natural Dermatophagoides spp. allergens.

収録刊行物

  • アレルギー  

    アレルギー 59(2), 109-116, 2010 

    一般社団法人 日本アレルギー学会

参考文献:  20件

各種コード

  • NII論文ID(NAID)
    110007573564
  • NII書誌ID(NCID)
    AN00012583
  • 本文言語コード
    JPN
  • 資料種別
    ART
  • ISSN
    00214884
  • NDL 記事登録ID
    10609677
  • NDL 雑誌分類
    ZS9(科学技術--医学--病理学・微生物学・寄生虫学・感染・免疫学・血清学・アレルギー)
  • NDL 請求記号
    Z19-32
  • データ提供元
    CJP書誌  NDL  J-STAGE 
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