マイクロウェーブ固定で観察した鼻アレルギー鼻粘膜中の好酸球

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タイトル別名
  • Eosinophils Contained in the Nasal Mucosae of Nasal Allergy Patients :Observation Through Microwave Fixation
  • マイクロ ウェーブ コテイ デ カンサツ シタ ハナ アレルギー ビネンマク チュウ ノ コウサンキュウ

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抄録

type:原著

type:Original

好酸球顆粒内蛋白は組織障害性物質であることが知られている.しかし,これらの蛋白がどのように細胞外へ放出されるかの報告は非常に少ない.今回,我々はタンニンを含んだ固定液を用いてマイクロウェーブ照射(MWI)を試みた.タンニンは蛋白の固定力が強く,蛋白を高電子物質として可視化する.好酸球顆粒内蛋白がどのように顆粒外に出てくるかを検討した.MWIを施して, そしてこの結果が既に報告されているDAB 法による顆粒蛋白(EPO)の局在と一致するか検討した.【方法】RAST検査でハウスダスト陽性のアレルギー性鼻炎患者の下甲介粘膜を対象とした.粘膜採取後直ちにマイクロウェーブ迅速処理装置(MI-77)を使用し300W60秒間連続照射を行った.コントロールはMWI なしの従来の固定法とDAB(diaminobenzidine)法によるEPO染色とした.その後,エポン樹脂に包埋し超薄切片を作製し透過型電子顕微鏡(日本電子製JEM-1200EX)で観察した.【結果】好酸球が活性化すると顆粒膜に管状構造の出現が認められた.マイクロウェーブ固定では,この管状構造の中に顆粒蛋白と思われる高電子物質が観察された.顆粒蛋白が管状構造物を通って細胞外に放出される像は観察できず,顆粒蛋白は細胞質内に観察された.【結論】MWIによりタンニンが組織深部まで瞬時に浸透したため顆粒から漏出した顆粒蛋白を生体内の状態で観察する事が出来たものと考える.顆粒内蛋白はまず顆粒から細胞質内に放出されるものと考えられた.この結果はDAB 法によるEPOの局在と一致する結果であった.

Objective:It is known that proteins in the eosinophilicgranules are tissue disrupting substances. However, studieson the manner by which these proteins are released intoextra-cellular space are extremely rare. In this study, an attemptwas made to use microwave irradiation (MWI) byemploying a fixation solution containing tannin, which is apotent protein fixing agent that renders proteins visible ashigh electron substances. This study was conducted to observethe manner by which eosinophil granular proteins arereleased into extra-granular space. By applying MWI, theresults were examined if they coincided with the localizationof eosinophil peroxidase( EPO) according to the DABmethod that has already been reported.Method:Mucosa from the inferior concha was collectedfrom patients with allergic rhinitis who gave positive responsesto house dust at RAST tests. Immediately after collection,the mucosal specimens in a fixation solution containingtannin were continuously irradiated at 300 W for 60seconds.The specimens used for the control were subjected to aconventional fixation method without microwave irradiationand to an EPO staining by the DAB method. They wereobserved under transmission electron microscopy.Results:Activation of eosinophils was followed by thedevelopment of a tubular structure in the granular membrane.Microwave fixation allowed one to observe a highelectron substance, which was suspected to be a granularprotein, in this tubular structure. No image was observedthat was suggestive of a release of this granular proteinthrough the tubular structure and into the extra-cellularspace. The granular protein was observed in the cytoplasm.Conclusion:The belief was that microwave fixation instantlycauses tannin to infiltrate into a deep section of thetissue, thus allowing one to observe the granular proteinthat has leaked from the granules, while reproducing theprocess that would take place in vivo. It was suggested thatgranular protein is first released from the granules into thecytoplasm. This observation coincides with the localizationof EPO according to the DAB method.

identifier:9

identifier:KJ00006377919

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