好熱好酸性アーキアSulfolobus tokodaii由来シスタチオニンγ－シンターゼの精製及び性質検討

• 篠崎, 舞

• 柳谷, 昌彦

• 兼田, 翔一郎

• 工藤, 大蔵

• 遠藤, 祐一

• 田村, 隆

• 倉光, 成紀

• 稲垣, 賢二

書誌事項

タイトル別名

• コウネツ コウサンセイ アーキア Sulfolobus tokodaii ユライ シスタチオニン ガンマ シンターゼ ノ セイセイ オヨビ セイシツ ケントウ

抄録

好熱好酸性アーキアSulfolobus tokodaii由来シスタチオニンγ－シンターゼ（stCGS）遺伝子をpET-11aに組み込みpET-stCGSを構築した。このベクターでE. coli Rosetta-gami（DE3）を形質転換し、本遺伝子を発現させ、精製及び性質検討を行った。大腸菌で発現したシスタチオニンγ－シンターゼの活性が無細胞抽出液で確認できた。S. tokodaiiシスタチオニンγ－シンターゼを70℃熱処理DEAE－トヨパールイオン交換カラム等により単一精製した。精製酵素の最適温度は100℃以上であり、熱安定性は60分間処理で70℃までほぼ100％の残存活性を示した。また、最適pHについてはリン酸緩衝液やブリトン－ロビンソン広域緩衝液の場合はpH7.0の時が最も活性が高く、トリス塩酸緩衝液の場合はpH9.0が最適であった。pH安定性についてはpH5.0〜9.0において安定であった。O－ホスホ－L－ホモセリンに対するKm、Vmaxは、それぞれ0.82mM、2.42U／mgであった。アポ酵素のホロ化実験により、本酵素活性がPLPに依存していることが明らかとなった。更に本酵素の脱離反応での基質特異性の検討を行った。変異酵素を用いた実験により、stCGSの基質特異性には、活性中心に存在するPhe97を含む領域が深く関わっていることが示唆された。

収録刊行物

• 岡山大學農學部學術報告 = Scientific report of the Faculty of Agriculture, Okayama University

  岡山大學農學部學術報告 = Scientific report of the Faculty of Agriculture, Okayama University (99), 7-12, 2010-02

  岡山大学農学部

キーワード

• cystathionine γ-synthase
• pyridoxal 5’-phosphate
• thermoacidophilic archaea
• Sulfolobus tokodaii

詳細情報

• CRID: 1050282813689035648
• NII論文ID: 120002309199
• NII書誌ID: AN00033029
• ISSN: 04740254
• NDL書誌ID: 10582137
• Web Site: https://agriknowledge.affrc.go.jp/RN/2010790175
• Web Site: https://ousar.lib.okayama-u.ac.jp/19876
• Web Site: https://ndlsearch.ndl.go.jp/books/R000000004-I10582137
• 本文言語コード: ja
• 資料種別: journal article
• データソース種別:
  • IRDB
  • NDL
  • CiNii Articles