〈研究ノート〉マウス体外成熟由来卵子における内在性ミトコンドリアおよびmtDNA の枯渇化の検討

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タイトル別名
  • Investigation of endogenous mitochondria and mtDNA depletion in mouse in vitro matured oocytes
  • マウス タイガイ セイジュク ユライ ランシ ニ オケル ナイザイセイ ミトコンドリア オヨビ mtDNA ノ コカツカ ノ ケントウ

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抄録

本研究では、マウスにおいてGV 期卵子の体外成熟培養中にミトコンドリアDNA（mtDNA）複製阻害剤であるddC またはエチジウムブロマイド（EtBr）を作用させて、マウス成熟卵子細胞質内におけるミトコンドリアおよびmtDNA の枯渇化が可能であるかを検討した。PMSG を投与後46～48 時間目の成熟齢のB6D2F1 雌マウスからGV 期卵子を回収し、0、1、10、100 および1,000μM のddC または0、1、5 および10μg/mL のEtBr を添加したmTaM 培地で16 時間体外成熟させた。ddC は成熟率および成熟卵子におけるmtDNA のコピー数に影響をおよぼさなかった。1 または5μg/mL のEtBr で成熟した卵子の成熟率は低下する傾向にあり、10μg/mL のEtBr と共に成熟培養した卵子は、著しく低い成熟率を示した。5 または10μg/mL のEtBr と共に体外成熟培養したマウス卵子のmtDNA のコピー数は減少する傾向を示した。加えて、この濃度で体外成熟した卵子において、Mito Tracker Red によって染色された内在性ミトコンドリアの蛍光輝度を測定することにより、ミトコンドリア量が著しく枯渇化していることが確認された。以上の結果から、EtBr を添加した培地で体外成熟させたマウス成熟卵子において、ミトコンドリアの枯渇化は可能であることが示された。 In this study, we examined the depletion of mitochondria and mitochondria DNA（ mtDNA） by using mtDNA replication inhibitors, 2', 3'-Dideoxycytidine（ ddC） or Ethidium Bromide（ EtBr） while oocyte maturation in-vitro in mouse matured oocyte. GV stage oocytes were collected from mature B6D2F1 female mice and matured for 16hours in-vitro in mTaM medium supplemented with 0, 1, 10, 100 and 1,000μM ddC or 0, 1, 5 and 10μg/mL EtBr. There was no effect of ddC on oocyte maturation rate and the copy number of mtDNA in matured oocytes. There was decreasing tendency of oocyte maturation in oocytes matured with 1 or 5μg/mL EtBr and oocyte maturation was significantly decreased in oocytes matured with 10μg/mL EtBr（ P＜0.05）. The copy number of mtDNA in mouse matured oocytes with 5 or 10μg/mL EtBr showed also decreasing tendency. In addition, the significant depletion of mitochondria in mouse matured oocytes with 5 or 10μg/mL EtBr was confirmed by the fluorescence brightness measurement of mitochondria staining by Mito Tracker Red. From these results, it was suggested that the depletion of mitochondria and mtDNA in mouse matured oocyte is possible by maturing mouse oocyte in-vitro in EtBr supplemented culture medium.

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