ブタ線維芽細胞増殖因子4タンパク質の生産およびPEF SV40細胞の細胞増殖に及ぼす影響

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抄録

【目的】マウスの胚発生において，線維芽細胞増殖因子4（FGF4）は胎盤形成に関与する，重要な細胞増殖因子である。しかし，主要な産業動物であるブタのFGF4構造遺伝子塩基配列（GenBank XM_003122418）はドラフトシークエンスであるために誤りが存在する可能性が否定できない。そこで本研究では，品種が明らかなブタに由来するFGF4構造遺伝子の全塩基配列を決定した。また，大腸菌によりブタFGF4タンパク質を生産し，細胞増殖促進活性を検討した。【材料および方法】ランドレース種（2頭），デュロック種（4頭）の白血球からゲノムDNAを調製し，FGF4構造遺伝子の全塩基配列を決定した。決定した配列情報に基づき，N末端側にHisタグを付加し，かつ，分泌シグナルペプチドを除去した成熟型ブタFGF4（HispFGF4）を大腸菌において発現させ，ヘパリンカラムクロマトグラフィーにより精製した。次に，HispFGF4によるブタ胎仔線維芽細胞株PEF SV40細胞の増殖促進活性を検討した。さらに，FGF受容体活性の阻害剤（PD173074）を用いて，HispFGF4の作用経路を検討した。【結果および考察】ランドレース種，デュロック種に由来するFGF4構造遺伝子の塩基配列と，GenBank登録配列（XM_003122418）を比較したところ，サイレント変異は認められたものの，アミノ酸配列は完全に一致した。大腸菌により，推定した一次構造に基づいたHispFGF4を発現することができた。ヘパリンカラムクロマトグラフィーにより分画すると，0.92 M NaClにより溶出された。精製したHispFGF4の細胞増殖促進活性を検討したところ，PEF SV40細胞の増殖が有意（P<0.05）に促進された。PD173074を添加すると，HispFGF4による細胞増殖は有意（P<0.01）に抑制された。以上の結果より，生物活性を有するHispFGF4を生産することができたことが示された。

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  • CRID
    1390001205715664768
  • NII論文ID
    130005051156
  • DOI
    10.14882/jrds.106.0.p-29.0
  • 本文言語コード
    ja
  • データソース種別
    • JaLC
    • CiNii Articles
  • 抄録ライセンスフラグ
    使用不可

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