トランスジェニックマウスを用いた母性遺伝子プロモーター解析

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タイトル別名
  • Analysis of Maternal Gene Promoters in the Transgenic Mouse

抄録

【目的】母性遺伝子由来の転写物やその産物のタンパク質は、卵胞発育や受精及び胚発生に重要な役割を果たす。これまで母性遺伝子のZP3やGDF-9遺伝子のプロモーター領域にはE-boxやNBE(Nobox binding element) 領域が存在し、これらの領域が卵母細胞特異的発現に重要である。しかし、他の母性遺伝子のプロモーター領域の転写調節に関する分子機構はわかっていない。そこで本実験では、3つの母性発現遺伝子(Histone H1oo(H1oo), Nucleoplasmin 2 (Npm2), Zygiote arrest 1 (Zar1))に着目し、それらのプロモーター領域を単離し、プロモーター領域において発現が制御されるレポーター（ルシフェラーゼ）発現ベクターを構築した。その後、ベクターを除去した導入遺伝子を使って、形質転換マウス(Tgマウス)の作出を行い、発生過程における各々のプロモーター活性を検討した。【方法】ICR系マウスを用い、常法に従って、遺伝子注入操作した受精卵を、偽妊娠1日目の成熟ICR系雌マウスの卵管へ移植し産仔を得た。そして、生後3週間目に尾部組織を採取し、高分子DNAを抽出・精製後、サザンブロッティング法により、導入遺伝子断片のマウス染色体上への組み込みを解析した。得られたTg雌マウス由来卵巣を供試し、原始卵胞、一次卵胞、二次卵胞及び胞状卵胞そして MII期卵を得た。さらに、常法に従って体外受精を行い、1～2細胞期胚を獲得した。獲得した卵及び胚において、ルシフェラーゼ遺伝子発現をシグナルフォトンカウンターを用いて観察した。また卵巣全体を供試して、抗LUC抗体を用いた免疫組織化学的解析を行った。【結果】3つの母性遺伝子プロモーターを有する発現コンストラクト（ H1oo Pro/luc+/SV40, Npm2　Pro/luc+/SV40, Zar 1 Pro/luc+/SV40）からそれぞれ3匹、3匹、1匹のTgマウスが作成できた。また、H1ooPro/luc+/SV40導入マウスで、GV期及びMII期の卵母細胞においてルシフェラーゼ遺伝子発現が観察された。

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詳細情報 詳細情報について

  • CRID
    1390001205714387200
  • NII論文ID
    130007022750
  • DOI
    10.14882/jrds.101.0.213.0
  • 本文言語コード
    ja
  • データソース種別
    • JaLC
    • CiNii Articles
  • 抄録ライセンスフラグ
    使用不可

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