糖鎖を除去したイソプルラナーゼは酵素活性を保っている Deglycosylated Isopullulanase Retains Enzymatic Activity

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Author(s)

    • 殿塚 隆史 TONOZUKA Takashi
    • 東京農工大学農学部応用生物科学科 Department of Applied Biological Science, Faculty of Agriculture, Tokyo University of Agriculture and Technology
    • 坂野 好幸 SAKANO Yoshiyuki
    • 東京農工大学農学部応用生物科学科 Department of Applied Biological Science, Faculty of Agriculture, Tokyo University of Agriculture and Technology

Abstract

細胞結合型のAspergillus nigerのイソプルラナーゼ(IPU)は糖蛋白質であり,プルランを加水分解し,イソバノースを生成する酵素である.Aspergillus oryzae M-2-3を宿主として,A. niger IPU遺伝子を発現させて得たrecombinant IPU (rec-IPU)の糖鎖含量はendoglycosidase H (Endo H)で13時間処理すると,33.8%から2.1%に減少し,糖鎖除去したIPUの活性はrec-IPUの活性の65%を保持していた.3Deg-IPU(Endo Hで3時間処理して調製された酵素標品;6.8%糖含量)の基質特異性や至適pH・温度はrec-IPUやnative IPUと変わらないが,反応速度論定数は,プルランに対するKm値を除いて,プルランに対するk<SUB>o</SUB>,緬/Km値,とパノースに対すK<SUB>m</SUB>, k<SUB>o</SUB>, k<SUB>o</SUB>/K<SUB>m</SUB>値は糖鎖含量が減るにつれ減少した.また,レクチンプロット法によって,糖鎖の種類を検討した結果,rec-IPUの糖鎖はハイブリッド型糖鎖,もしくはハイブリッド型と高マンノース型糖鎖であると分類された.

Isopullulanase (IPU) from Aspergillus niger ATCC 9642 is a cell-bound glycoprotein that hydrolyzes pullulan into isopanose. The sugar content of the recombinant enzyme expressed in Aspergillus oryzae M-2-3 decreased from 33.8 to 2.1% by 13 h-treatment with endoglycosidase H (Endo H), and deglycosylated rec-IPU had 65% of the original activity. 3 Deg-IPU (prepared by 3 h-treatment of Endo H; 6.8% sugar) showed the same substrate specificities, optimum pH and optimum temperature as native IPU and rec-IPU, while its kinetic parameters, ko and ko/Km values for pullulan, and K<SUB>m</SUB>, k<SUB>o</SUB> and k<SUB>o</SUB>/K<SUB>m</SUB> values for panose decreased with deglycosylation, except Km for pullulan. The oligosaccharide chains of rec-IPU were typed using lectin-peroxidase reagents and classified as hybrid- and/or high-mannose types.

Journal

  • Journal of Applied Glycoscience

    Journal of Applied Glycoscience 47(3), 287-292, 2000-08-31

    The Japanese Society of Applied Glycoscience

References:  25

Cited by:  2

Codes

  • NII Article ID (NAID)
    10008252053
  • NII NACSIS-CAT ID (NCID)
    AN10453916
  • Text Lang
    ENG
  • Article Type
    Journal Article
  • ISSN
    13403494
  • NDL Article ID
    5521363
  • NDL Source Classification
    ZP24(科学技術--化学・化学工業--糖・澱粉)
  • NDL Call No.
    Z17-15
  • Data Source
    CJP  CJPref  NDL  J-STAGE  JASI 
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