トラマメ登熟種子中におけるアミラーゼおよび枝つけ酵素 Amylases and Branching Enzyme of Developing Kidney Bean Seeds on Native Electrophoretic Gel

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Abstract

トラマメ(Phaseolus vulgaris L.)登熟種子より調製した粗抽出液を50倍に濃縮後,可溶性澱粉,β-リミットデキストリンおよびマルトースに作用させたところ,いずれの基質にも水解作用を示し,アミラーゼの存在が示唆された.このような粗抽出液をネイティブ電気泳動後,pH5.6で可溶性澱粉を基質に活性染色すると3本のバンドが,β-リミットデキストリンでは2本の活性バンドが認められた.長径12mmの粗抽出液を70℃ で処理すると,いずれを基質とした場合にも2本のバンドが認められた.精製α-アミラーゼから調製した抗体を用いたウエスタンブロット法でも幾つかのバンドが検出された.したがって,登熟種子にもα-アミラーゼが存在するものと考えられた.一方,熱処理およびβ-リミットデキストリンゲルで消失する活性バンドはβ-アミラーゼないしは枝つけ酵素と想定されるため,電気泳動後,アミロースを含むゲルに転写し,pH7.0で活性バンドの検出を行った.その結果,想定したバンドは本条件では出現せず,精製枝つけ酵素と同位置の2本を含む数本のバンドが新たに認められた.登熟期におけるα-アミラーゼの存在をより確実なものとするため,粗抽出液をβ-リミットデキストリンに作用させ,生成物を薄層クロマトグラフィーで分析した.無処理の酵素液では主としてグルコースとマルトースを,熱処理酵素液では上記の2種の他に,マルトトリオース,マルトテトラオースなどのオリゴ糖も生じた.この反応様式は発芽種子より精製したα-アミラーゼのものによく類似していた.

When the crude extract from developing kidney bean (Phaseolus vulgaris L.) seeds was incubated soluble starch, β-limit dextrin or maltose, hydrolyzing activities were detected. The activity staining of gels of native polyacrylamide gel electrophoresis (i.e., zymograms) at pH 5.6 showed three bands on soluble starch and two on β-limit dextrin. Two active bands on both substrates were to heat treatment (at 70°C), while the other band from soluble starch had no activity. These results suggest that the heat-stable active bands correspond to α-amylases and the other to β-amylasea branching enzyme. Western blot analysis revealed that some bands bound to antiserum against amylase purified from germinating seeds. The zymogram at pH 7.0 indicated additional active from those observed at pH 5.6 on amylose. The mobilities of these two newly detected bands coincident with branching enzymes 1 and 2 purified from developing kidney bean seeds, suggesting the active band observed on soluble starch but not on β-limit dextrin at pH 5.6 was β-amylase. When the heat-treated crude extract was incubated with fl-limit dextrin at pH 5.6, glucose, maltose, other oligosaccharides were produced as evidenced by thin-layer chromatography, similar to α-amylase purified from germinating seeds. These data indicate that α-amylase exists in developing seeds.

Journal

  • Journal of Applied Glycoscience

    Journal of Applied Glycoscience 45(2), 117-122, 1998-06-30

    The Japanese Society of Applied Glycoscience

References:  13

Cited by:  1

Codes

  • NII Article ID (NAID)
    10008257889
  • NII NACSIS-CAT ID (NCID)
    AN10453916
  • Text Lang
    ENG
  • Article Type
    Journal Article
  • ISSN
    13403494
  • NDL Article ID
    4505300
  • NDL Source Classification
    ZP24(科学技術--化学・化学工業--糖・澱粉)
  • NDL Call No.
    Z17-15
  • Data Source
    CJP  CJPref  NDL  J-STAGE  JASI 
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