タカアミラーゼAの基質結合に関わるTrp残基の役割 Role of Trp Residue in Taka-amylase A for Substrate Binding

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Abstract

タカアミラーゼA(TAA)の基質結合能を化学修飾,アフィニティー電気泳動,アフィニティークロマトグラフィー法で検討した.OPA(o-フタルアルデヒド)やTNBS(トリニトロベンゼンスルホン酸)によるアミノ基の修飾反応に比べると,NBS(N-ブロモスクシンイミド)によるTrpの修飾でTAAは著しく失活し,修飾TAAの可溶性デンプンに対するアフィニティは大幅に低下した.これらの結果と既報[Y.SASAKI et al., Biosci. Biotech. Biochem.,61,1840-1843(1997)]の結果:(基質結合能をもつペプチドとして単離した3種のペプチドがいずれも配列中にTrpを含んでいた)から, TAA分子中のTrp残基は基質との結合および酵素活性の保持に重要な役割を果たしていることが示唆された.また,基質多糖へのアフィニティークロマトグラフィーによる解析から,TAAはデキストラン分子を認識することが示され,この手法がアフィニティー電気泳動とともに,酵素作用を受けにくい基質アナログ等に対する酵素の親和性の測定に有用であることが明らかとなった.

The substrate binding ability of Taka-amylase A (TAA) was evaluated by chemical modification, affinity gel electrophoresis and affinity chromatography methods.. Compared with modifications of the amino group with o-phthalaldehyde (OPA) and 2, 4, 6-trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS), modification of the Trp residue with N-bromosucciniimide (NBS) caused a strong and rapid inactivation of TAA. NBS-modified TAA greatly impaired the affinity to substrate soluble starch. Based on these results and previous results of isolation of substrate-binding peptides, all of which contained Trp residues in the sequence [Y. SASAKI et al.: Biosci. Biotech. Biochem., 61, 1840-1843 (1997)], it was strongly suggested that Trp residues in the TAA molecule played an important role in substrate binding and subsequently in the catalytic activity. Moreover, affinity analyses, which were useful for the evaluation of enzyme affinity to substrates or its analogs having low susceptibility to TAA in the activity measurement, indicated that TAA could recognize the dextran molecule as the substrate analog.

Journal

  • Journal of Applied Glycoscience

    Journal of Applied Glycoscience 45(3), 247-253, 1998-08-31

    The Japanese Society of Applied Glycoscience

References:  26

Cited by:  1

Codes

  • NII Article ID (NAID)
    10008258234
  • NII NACSIS-CAT ID (NCID)
    AN10453916
  • Text Lang
    ENG
  • Article Type
    Journal Article
  • ISSN
    13403494
  • NDL Article ID
    4551725
  • NDL Source Classification
    ZP24(科学技術--化学・化学工業--糖・澱粉)
  • NDL Call No.
    Z17-15
  • Data Source
    CJP  CJPref  NDL  J-STAGE  JASI 
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