イネ品種銀坊主に適した高効率アグロバクテリウム形質転換系の開発 A highly effective <i>Agrobacterium</i>-mediated transformation method for a rice variety Gimbozu

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Abstract

農業上重要な遺伝子を同定するための相補性検定において,形質転換効率の改善は重要である.しかしながら,アグロバクテリウムを介したイネ形質転換効率において大きな品種間差異が存在する.銀坊主には,非常に活性化された転移因子<i>mPing</i>が内在しており,価値の高い研究材料である.我々は,<i>mPing</i> SCARマーカーおよび<i>mPing</i>タギングシステムを利用し,銀坊主に誘発された突然変異遺伝子を同定することに成功してきた.しかしながら,銀坊主の非常に低い形質転換効率は,候補遺伝子の相補性検定および機能解析の妨げとなっている.本報では,銀坊主に適した効果的なアグロバクテリウム形質変換法を報告する.銀坊主は,アグロバクテリウム感染に対する耐性が極めて弱く,アグロバクテリウムとの共存培養後に活性のあるカルスを再生することが困難であった.これを克服するために,感染には非常に低濃度のアグロバクテリウムを,一次スクリーニングでは高濃度のメロペンを使用した.また,共存培養時に感染したカルスを紙タオルで水分を拭き取って乾燥した状態を保つことも重要であった.その結果,一度に十分量の形質転換体を獲得することが可能となった.形質転換効率は14.3%であり,再生効率は90%以上であった.

An efficient gene transformation is a crucial for complementation test to identify the agronomically important genes. However, significant varietal difference was observed in the efficiency of <i>Agrobacterium</i>-mediated transformation in rice. Gimbozu has become a valuable research material for its highly activated transposable element, <i>mPing</i>. With the use of <i>mPing</i> SCAR markers and <i>mPing</i> tagging system, we have successfully identified several mutant genes induced in Gimbozu. However, the very low transformation efficiency in Gimbozu prevents the complementation test and functional analysis of the candidate genes. Here, we report an effective <i>Agrobacterium</i>-mediated transformation method applicable to Gimbozu. It was very difficult to recover viable calli from Gimbozu after the co-cultivation with <i>Agrobacterium</i> to obtain the transformants, as it is very sensitive to the <i>Agrobacterium</i> infection. To overcome this difficulty, we used a very low density of <i>Agrobacterium</i> (OD600=0.001) for infection and a high amount of meropenem at first screening. It was also important to keep infected calli dry by blotting a callus on paper towel and air drying very carefully at the time of co-cultivation. As a result, we got a sufficient number of transgenic plants in a time (90 plants from 5 resistant calli). Transformation efficiency became 14.3% and the regeneration efficiency was more than 90%.

Journal

  • Journal of Crop Research

    Journal of Crop Research 57(0), 33-38, 2012

    The Society of Crop Science and Breeding in Kinki, Japan

Codes

  • NII Article ID (NAID)
    110009553887
  • NII NACSIS-CAT ID (NCID)
    AA12344964
  • Text Lang
    ENG
  • ISSN
    1882-885X
  • NDL Article ID
    026276509
  • NDL Call No.
    Z18-705
  • Data Source
    NDL  NII-ELS  J-STAGE 
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