エンザイモグラムにおけるProteaseの挙動  [in Japanese] Electrophoretic behavior of protease on enzymogram: Estimation of the molecular weight.:Estimation of the molecular weight  [in Japanese]

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Abstract

enzymogram上におけるみかけの分子量は, ゲル基質の濃度によって異なることが判明した。われわれは, この変化は電気泳動中の酵素と基質の親和性に基づく泳動速度の遅延が原因であり, ミカエリス定数 (Km) 値に依存するのではないかと推察し, それに基づいて電気泳動上での真の分子量を推定する関係式を検討した。みかけの分子量から真の分子量を推定する方法としてゼラチン濃度を変化させ, その関係を調べたところ, 基質濃度およびKm値により導き出される関係式<BR>〓<BR>が成り立つことが示唆された。したがって本法は, 基質存在下で分子量が本来の値より大きく算出されてしまうenzymogramで, その基質濃度に依存しない, 基質が存在しないところの分子量を導き出す方法である。さらに, 二次元enzymographyを施行したところ, より正確な分子量を導き出せることが判明した。またこうした解析によって分子量の推定のみならず複数の酵素が共存している時でもそれぞれの酵素の基質に対するKm値を求めることが理論的に可能となった。

The electrophoretic behavior of the proteases (collagenase, plasmin, and elastase) were analyzed on the enzyme substrate copolymerized SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), namely enzymography or zymography.<BR>The proteases showed individual affinities to gelatin substrate copolymerized on polyacrylamide gel. Therefore electrophoretic movement and the calculated molecular weight were dependent on the substrate concentrations.<BR>Molecular weights estimated from a degree of retardation by enzyme substrate was postulated in the following equation.<BR>_??_<BR>The molecular weights (MW) of the enzymes in the absence of substrate (MW real) and Michaelis constant (Km) were calculated from the above equation.<BR>MW<SUB>app</SUB> and S expressed molecular weights of apparent and substrate concentrations respectively. From the above results, electrophoretic behavoiour of the enzyme on enzymogram was recognized as an affinity electrophoresis even in the presence of SDS.<BR>Application of two-dimensional enzymography (with or without substrate) gives us more info rmation about identification of enzymes.

Journal

  • Japanese Journal of Oral Biology

    Japanese Journal of Oral Biology 35(2), 186-196, 1993

    Japanese Association for Oral Biology

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